非洲猪瘟的流行与防控值得收藏 [复制链接]

一、背景非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)于年在肯尼亚第一次被报道，当时该病从非洲野猪传播给家猪，引起了一种死亡率为%的疾病。在年之前该病只存在于非洲，之后该病由安哥拉传播到了里斯本，表现为一种死亡率接近%的急性症状。该病于年传播到西班牙，随后到达法国()、意大利(、、)、马耳他()、比利时()，直至年新西兰也发生了该病的流行。ASF成为了葡萄牙和西班牙的一种地方病，直到年，因成功地实施了集中扑灭净化措施，两国扑灭该疫病。ASF在19世纪70年代到达西半球，发生疫病的国家包括古巴()、巴西()、多明尼加共和国()和海地()，但是之后被彻底根除了。当前，ASF是很多撒哈拉以南的非洲国家的地方病。在欧洲，ASF是撒丁岛(意大利)的一种地方病，在年，该病进入了高加索地区和俄罗斯联邦，这对于它周边的欧洲或亚洲国家都是一个威胁。非洲猪瘟病*(ASFV)是一种大型的、复杂的虹形病*，能导致高传染性、出血性疾病，所有品种和年龄的猪均可感染，ASF是一种复杂的疾病，还有可能引起向四周快速传播和重大的社会经济问题，以西班牙为例，*府为扑灭ASF的项目(-)花费了将近1亿美元，对ASF的成功控制很大程度上依赖实验室快速诊断技术和严格的卫生控制措施。现在还没有治疗措施或者有效的疫苗来控制该病，因此，ASF被认为是危害较大的全球性动物疾病。二、病因学ASFV是一个复杂的二十面体DNA病*，是非洲猪瘟病*科，非洲猪瘟病*属的唯一成员。其病*粒子包括许多同轴心结构，外部有六角形膜，六角形膜是病*穿过细胞膜出芽时形成的。电子显微镜观察表明，ASFFV病*粒子的平均直径大约是nm。ASFV的基因组与痘病*基因组很相似，该病*基因组包括一个线性的双链DNA分子，根据病*株的不同其大小约为-kb，它包含一个共价修饰、末端反向重复，大小为2.1~2.9kb的序列，整个DNA序列两条链包含~个开放阅读框。DNA的结构包括两个可变的末端和一个KB左右的保守的中心区域。左侧可变区(38~47kb)和右侧可变区(13~16kb)，编码五个多基因家族(MGFs)，分叫做MGF1O0,MGF,MGF，MGF，和MGF/。MGF的片段(3-20kb)的缺失和插入是基因组的大小变化的原因所在。不同来源的ASFV分离株在MGF上同提示这些区域或许与抗原变异演化和疫逃逸机制相关。较小变异(1kb)多发生在kb的保守中心区中的中心可变区(CVR)。从不同地区和宿主(家猪、疣猪、扁虱)上分离得到的1非洲和欧洲ASFV分离株，*力大小各不相同，在基因组水平也呈现显著的遗传差异，此分析揭示源于同一谱系的强弱**株也存在遗传差异性，强*分离株含或个多拷贝基因家族，而弱*株则是缺失的。这些区域已经功能分析证实为侵染巨噬细胞和蜱传宿主范围的重要决定因素。在细胞内的病*粒子中至少有28种结构蛋白被证实，有超过种的病*诱导蛋白从被感染猪的巨噬细胞中发现。黏附蛋白p12和p24在病*粒子的细胞外膜被发现，而蛋白p，p37，p34，p14位于病*核内。病*外膜还有CD2v(红细胞吸附蛋白)蛋白，该蛋白是病*粒子唯一的糖蛋白。某些蛋白，比如病*衣壳的主要成分p72或者病*外模的主要成分p54、p30，p12等都具有抗原性。据报道，有超过50种特异蛋白质都有免疫性，能够与感染或康复猪血清发生反应，尽管没有证实它们在诱导保护性免疫中的作用，但可以作为血清学诊断的候选抗原。ASFV不能诱导中和抗体，因此还没有对血清型进行分类，但是，基于p72基因的部分核酸序列分析的基因型分型，已经明确了22种AsFV的基因型。亚型是根据p54的全基因序列比对分型；通过对BL中的CvR的分析可以做更进一步区分。ASFV的22种基因型都是在非洲发现的首先在非洲西部发现的基因1型，其余21种基因型是在非洲大陆东部和南部发现的。起先在欧洲和西半球分离到的ASFV基因型都是在非洲西部发现的基因1型。但是，就像在非洲东南部存在的所有基因型一样，基因Ⅱ型也在年的时候传播到了高加索地区。ASFV在pH4~10的溶液中比较稳定，但是在pH4或者pH11.5、不含血清的培养基中会立刻失活(EFSA,)，该病*能在5℃的血清中存活6年，在pH13.4、含25%的血清培养基中能存活数日。60℃加热30min，或者56℃加热70minASFV就能被灭活。许多溶剂能够通过溶解囊膜使该病*失活，但是ASFV能够抵抗蛋白酶和核酸酶降解酶。ASFV流行株主要通过猪的单核细胞或巨噬细胞培养分离鉴，病*在普通细胞中不能复制。在实验室多株ASFV已经在普通细胞中适应生长，包括VERO、MS和CV细胞系。最近，COS-1细胞系已经用于流行株的分离鉴定和滴定，以及实验室工程ASFV*株传代。三、公共卫生ASFV不会感染人，也不会直接对公共卫生造成危害。但是，ASFV对猪及猪产品、食品安全有很重要的社会和经济影响，特别是在那些以猪产品为主要蛋白质来源的国家。四、流行病学ASF是撒哈拉以南20多个非洲国家的方流行病，在欧洲，ASF是撤丁岛(Sardinia)地区(意大利)的流行病，分子流行病学的研究证明，这是由于19世纪70年代基因1型*株的引入导致的()，在年6月，ASF在格鲁吉亚暴发，随后在高加索地区发现了这种病*，随后，这种病*很快扩散到了阿美尼亚，阿塞拜疆和前苏联范围，然后到达了乌克兰边境，以及苏联西北部波罗的海和巴伦支海附近。这次暴发是由在非洲东南部流行的基因Ⅱ型引起的，调查结果已经证明，这次暴发是由于年欧洲ASFV的单一入侵，到现在为止还没有发生分子的变异。不论是野猪还是家猪，都是ASFV的天然宿主。欧洲野猪比较容易被ASFV感染，表现的临床症状和死亡率与家猪很相似，相反，有三种非洲野猪可以隐性带*，成为病*储存器，这三种动物是：疣猪、大林猪和非洲野猪。在非洲，ASFV的传播有一个比较复杂的循坏周期，包括非洲野猪，软蝉虫和家猪。在东部和南部地区，病*传播遵循一个古老的森林型周期，涉及软蜱和无症状感染疣猪和丛林猪，在流行地立现了两种传统的传播方式：一种是不包括疣猪的猪/蜱传播方式，另一种是猪/猪传播方式。在欧洲，健康动物包括家猪和野猪与蜱的直接接触造成的传播是最常见的传播途径，ASFV在家猪中的传播通过口腔、呼吸道以及其他裸露的部位。猪还有其他感染方式，比如说蜱的叮咬；皮肤的伤口；肌内注射、皮下注射、腹腔注射、静脉注射。许多种软蜱都是ASFV的携带者和传播者，包括非洲钝缘蜱和伊比利亚半岛的游走钝缘蜱。在伊比利亚半岛还会有游走的钝缘，这样的生物携带者之间发生的间接传播。尤其是在户外进行养猪生产。这些病*携带者在欧洲西部的危害暂时还不清楚。通过比较在欧洲和在非洲软蜱对ASFV的复制，发现了一个疾病流行病学方面的重要区别。ASFV经卵传播和种间传播的方式已洲钝缘蜱上得到证明,但是在欧洲，在游走钝缘蜱上只发现了种间传插传播方式。非洲也存在钝缘软蝉能够在实验条件下将ASFV传播给家猪。在南以及北美广泛分布的许多种类的蜱都能携带和传播ASFV。经过测验，所有种类的钝缘蜱都对ASFV易感。ASFV的潜伏期变化范围很大(4~19d)，这取决于它的种类以及它传播的途径。被野*株感染的家猪在潜伏期即在临床症状显现之前就向外界排*。观察到临床表现之后，ASFV能够通过分泌和排泄使排*达到高部对AsFV易感(EFsAsFV的伏期变化范围很取决于它的种类以及它传播的途径，被野每染的家在伏期即在临体症状显现之前就界排*，现察到临床表现之后，ASFV能够分路和排排*达到高峰，包括鼻涕、粪便，尿液，结膜渗出物，肠道内气体五、致病机理ASFV主要在病*入侵部位附近淋巴结的单核细胞和巨噬细胞中进行复制。经口感染时，病*首先在扁桃体和下颌淋巴结的单核细胞和巨噬细胞中进行复制，然后经血液和/或淋巴转移至病*二次复制的场所—淋巴结、骨髓、脾、肺、肝和肾。病*血症通常在感染后4~8d出现，由于缺乏中和抗体，将持续数周或数月。ASFV最先是在单核细胞和巨噬细胞中复制的，也会在内皮细胞，肝细胞，肾小管上皮细胞和中性粒细胞中复制。目前还未发现在B淋巴细胞和T淋巴细胞复制。病*进入易感细胞是通过受体介导的内吞作用，然后在细胞核附近的不同细胞质中复制。ASFV易与血液红细胞膜和血小板相互作用，能够引起感染猪的血细胞吸附现象。急性病例中的出血机理是由于在疾病后期，在内皮细胞中复制的病*使内皮细胞的吞噬活性增强引起的亚急性病例中的出血机理主要是因为血管壁的通透性升高而引起。急性病例中淋巴细胞减少的机理与淋巴器官的T区淋巴细胞凋亡有关，但是还不能证明ASFV能在T细胞和B细胞中复制，这表明会涉及其他机制，例如，ASFV感染的巨噬细胞释放细胞因子或细胞凋亡因子。亚急性非洲猪瘟表现为暂时性血小板减少，肺血液内巨噬细胞的活化可在急性和亚急性非洲猪瘟的后期引起肺水肿(死亡的主要原因)宿主的遗传因素或者是免疫因素是否决定了野生非洲野猪(疣猪和丛林猪)组织中病*滴度低和不易察觉的病*血症还不是很清楚。相似的，欧洲野猪比家猪表现出较高抗感染能力的原因也不是很清楚。六、临床症状非洲野猪对该病有很强的抵抗力，一般不表现出临床症状。不管是急性还是慢性感染，家猪和欧洲野猪表现有明显的临床症状，ASF的临床症状和许多其他猪的疾病很相似，特别是猪瘟和猪丹*。ASFV自然感染的潜伏期大约为4~19d在实验条件下，潜伏期可以缩短为2~5d，潜伏期的长短与接种的剂量和接种的途径有关。发病率取决于该*株是引起急性还是慢性疾病，病*释放的途径和是否存在出血(异位显性或者是出血性腹泻)。一般发病率在40%~85%之间。同样的，死亡率由ASFV*株的*力决定。高致病性*株死亡率可高达90%-%；中致病性*株在成年动物能引起20%~40%的死亡率，在幼年动物中引起70%~80%的死亡率；低致病性*株能够造成10%~30%的死亡率。ASF的临床症状既包括急性的(很少或没有临床症状的突然死亡)，也包括亚急性的或者是隐性感染，这取决于病*的*力、感染剂量和感染途径。非洲ASFV病*一般会导致急性症状，但是在一些地区，可能会引起亚急性和慢性的感染ASF急性症状表现为食欲减退、高温(40`42℃)、白细胞减少、肺水肿、淋巴组织的大量坏死和出血、皮下出血(特别是耳朵和两翼的出血)和高死亡率。在感染后期，可以看到病猪急的呼吸，由于肺部的病变鼻腔分泌大量的黏液在一些临床病例中可能会出现鼻出血、便秘、呕吐，可能还会有一定程度的腹泻。有时会观察到肛门出血(黑粪便)。有时会看到很明显的皮疹(大量充血导致皮肤发紫)或者是青紫的斑点，这些斑点在四肢、耳朵、胸部、腹部和会阴部位为不规则的紫色。可能还会出现血肿和一些坏死组织，这些症状在感染中等致病*株的猪中较为明显。怀孕母猪常发生流产。在某些地区存在着亚急性和慢性病例。亚急性的特征是血小板暂时性减少、白细胞减少和广泛性出血性病变。高致病性的ASFV*株主要能够导致急性病例。中致病性*株导致的临床症状变化多样：急性、亚急性和慢性。低致病性*株一般导致慢。七、病理变化ASF有很多种病变类型，这取决于病**株的*力。急性和亚急性以广泛性的出血和淋巴组织的坏死为病变特征。相反，在一些慢性或者亚临床病例病变很轻或者不存在病变。病变发生的主要部位包括脾脏、淋巴结、肾脏和心脏。脾脏可呈暗黑色、肿大、梗死和质度脆弱，有时见被膜下出血的大梗死灶。淋巴结见出血、水肿、易碎常似暗红色血肿。由于充血和被膜下出血，淋巴结切面呈大理石样变。肾脏表面及切面皮质部有斑点状出血，肾孟也有点状出血。有些病例可见带有出血的浆液性心包积液。在心内、外膜可见斑点状出血。在急性ASF还能看到一些其他病变，例如，腹腔内有浆液出血性渗出物，整个消化道黏膜水肿、出血。肝脏和胆囊充血，膀胱黏膜斑点状出血。胸腔积液及胸膜斑点状及常见肺水肿。脑膜、脉络膜、脑组织发生较为严重的充血。亚急性与急性的病变很相似，但亚急性的病变较轻，亚急性的主要病变特征是肾脏和淋巴结有较大的出点，牌脏肿大出血，肺部水种、出血，个别病例可见间质性肺炎。在急性ASF病例，血管和淋巴器官会出现组织病理学病变，主要包括出血、血管内形成微血以及内皮细胞的损伤，并伴有内皮下坏死细胞的大量聚集。急性和亚急性具有的主要特征病变，牌脏出血性肿大是由于架构组织缺失造成的，脾架构的缺失是因为病*入侵后的复制以及脾固有淋巴细胞坏死造成的。急性ASF的淋巴组织病变主要见于淋巴器官的T细胞区，但仍未观察到ASFV能在淋巴细胞中进行复制。慢性ASF主要病变特征是呼吸道的变化，但是病变很轻或者不明显。病变包括纤维素性胸膜炎、胸膜粘连、干酪样肺炎和淋巴网状组织增生纤维素性心包炎和坏死性皮肤病变也很常见。八、诊断实验室检测是准确诊断ASF所必需的，因为ASF的临床症状和病变与猪的其他一些出血性疾病很相似，比如，猪瘟(猪霍乱)、猪丹*和败血性沙门细菌病。不能根据临床症状和眼观病变来判断是否是ASF。尸检发现，高致病性*株感染致死的动物有很严重的肺水肿和牌肿大(较为严重的疾)变成暗红色，横跨整个腹腔，这是ASF的典型病变，称之为脾充血性肿大、出血性梗死和出血性脾炎。这种患病动物还会出现淋巴结出血，特别是胃、肝，肾等器官淋巴结，出血涉及皮质层和髓质层，在肾脏、膀胱黏膜、咽和喉、胸膜，心内膜及心包膜有点状出血，心包积液，腹水，胸腔积液，肝瘀血。很多实验室检查方法都可以用来诊断。实验室诊断常检查的器官包括淋巴结、肾脏、脾脏、肺、血液和血清。病变组织可用于病*的分离、检测。组织渗出液和血清主要做抗体检测，但也可以用来检测病*粒子。最方便、最安全、最常用的ASF检测方法是直接免疫荧光(DIF)、血细胞吸附试验(HA和聚合酶链式反应(PCR)。DIF检测的是脾脏、肺、淋巴结、肾脏等组织器官的病*抗原，检查可通过组织触片或冷冻切片进行。通过共轭免疫荧光的方法来检测ASFV。DIF用来检测急性ASF具有快速、经济和高敏感性的特点。但是，当检测亚急性或者慢性ASF时，DIF的敏感性只有40%。这种敏感性的降低可能是由于在组织中形成抗原抗体复合物，这种组织中的抗原抗体复合物能阻断ASFV抗原与标记的抗ASFV免疫球蛋白结合。由于血细胞吸附试验(HA)的特异性和敏感性，HA一般用于较宽范围的检测，HA方法应该被用来评估疑似暴发，特别是当其他测试为否定结果时，应该用HA方法进行确诊。血细胞吸附试验是利用红细胞能吸附在体外培养的感染ASFV的巨噬细胞膜表面。在ASFV诱导的细胞病变出现前，红细胞能在巨噬细胞周围形成典型的玫瑰花环。但是，尽管HA试验是检测ASFV的最敏感的方法，但应该指出的是，一些ASFV分离株能诱导巨噬细胞的病变，而不能出现血细胞吸附现象。这些*株可利用PCR或者DF方法检测细胞培养物进行确定。ASFV*株及无血细胞吸附现象和致病性较低的*株时显示出高度的一致性、特异性和高敏感性。引物和探针都是根据病*基因组中的高度保守区域VP72设计的。当出现ASFV抗体时就证明被感染了，因为现在还没有行之有效的疫苗。该病急性病例引起高死亡率，在血清学确诊前大量的感染猪就会死亡。然而，在亚急性疾病，一定比例的猪从感染中恢复过来，并产生高水平的ASFV特异性抗体免疫球蛋白M(lgM能检测到4DP，lgG能检测到6~8DP1。病*感染后抗体在体内循环的存在与病*相同，大约持续6个月,有的在病*感染几年后仍能被检测到。病*进入体内早期就显现并随后持续存在的抗体，使得它们可N用于检测亚急性和慢性表现的病例。鉴于同样原大因，作为病*扑灭计划的一部分，在实施监测策略方面发